中藥化學(xué)提取分離和鑒定方法
中藥化學(xué)提取分離和鑒定方法 （一）溶劑提取法： 　　1．溶劑提取法的原理：溶劑提取法是根據(jù)中草藥中各種成分在溶劑中的溶解性質(zhì)， 選用對(duì)活性成分溶解度大，對(duì)不需要溶出成分溶解度小的溶劑，而將有效成分從藥材組 織內(nèi)溶解出來的方法。當(dāng)溶劑加到中草藥原料（需適當(dāng)粉碎）中時(shí)，溶劑由于擴(kuò)散、滲 透作用逐漸通過細(xì)胞壁透入到細(xì)胞內(nèi)，溶解了可溶性物質(zhì)，而造成細(xì)胞內(nèi)外的濃度差， 于是細(xì)胞內(nèi)的濃溶液不斷向外擴(kuò)散，溶劑又不斷進(jìn)入藥材組織細(xì)胞中，如此多次往返， 直至細(xì)胞內(nèi)外溶液濃度達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡時(shí)，將此飽和溶液濾出，繼續(xù)多次加入新溶劑，就 可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。 　　中草藥成分在溶劑中的溶解度直接與溶劑性質(zhì)有關(guān)。溶劑可分為水、親本性有機(jī)溶 劑及親脂性有機(jī)溶劑，被溶解物質(zhì)也有親水性及親脂性的不同。 有機(jī)化合物分子結(jié)構(gòu)中親水性基團(tuán)多，其極性大而疏于油；有的親水性基團(tuán)少，其。極 性小而疏于水。這種親水性、親脂性及其程度的大小，是和化合物的分子結(jié)構(gòu)直接相關(guān) 。一般來說，兩種基本母核相同的成分，其分子中功能基的極性越大，或極性功能基數(shù) 量越多，則整個(gè)分子的極性大，親水性強(qiáng)，而親脂性就越弱，其分子非極性部分越大， 或碳鍵越長，則極性小，親脂性強(qiáng)，而親水性就越弱。 　　各類溶劑的性質(zhì)，同樣也與其分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。例如甲醇、乙醇是親水性比較強(qiáng)的溶 劑，它們的分子比較小，有羥基存在，與水的結(jié)構(gòu)很近似，所以能夠和水任意混合。丁 醇和戊醇分子中雖都有羥基，保持和水有相似處，但分子逐漸地加大，與水性質(zhì)也就逐 漸疏遠(yuǎn)。所以它們能彼此部分互溶，在它們互溶達(dá)到飽和狀態(tài)之后，丁醇或戊醇都能與 水分層。氯仿、苯和石油醚是烴類或氯烴衍生物，分子中沒有氧，屬于親脂性強(qiáng)的溶劑 。 　　這樣，我們就可以通過時(shí)中草藥成分結(jié)構(gòu)分析，去估計(jì)它們的此類性質(zhì)和選用的溶 劑。例如葡萄糖、蔗糖等分子比較小的多羥基化合物，具有強(qiáng)親水性，極易溶于水，就 是在親水性比較強(qiáng)的乙醇中也難于溶解。淀粉雖然羥基數(shù)目多，但分子大大，所以難溶 解于水。蛋白質(zhì)和氨基酸都是酸堿兩性化合物，有一定程度的極性，所以能溶于水，不 溶于或難溶子有機(jī)溶劑。甙類都比其甙元的親水性強(qiáng)，特別是皂甙由于它們的分子中往 往結(jié)合有多數(shù)糖分子，羥基數(shù)目多，能表現(xiàn)出較強(qiáng)的親水性，而皂甙元?jiǎng)t屬于親脂性強(qiáng) 的化合物。多數(shù)游離的生物堿是親脂性化合物，與酸結(jié)合成鹽后，能夠離子化，加強(qiáng)了 極性，就變?yōu)橛H水的注質(zhì)，這些生物堿可稱為半極性化合物。所以，生物堿的鹽類易溶 于水，不溶或難溶于有機(jī)溶劑；而多數(shù)游離的生物堿不溶或難溶于水，易溶于親脂性溶 劑，一般以在氯仿中溶解度最大。鞣質(zhì)是多羥基的化臺(tái)物，為親水性的物質(zhì)。油脂、揮 發(fā)油、蠟、脂溶性色素都是強(qiáng)親脂性的成分。 　　總的說來，只要中草藥成分的親水性和親脂性與溶劑的此項(xiàng)性質(zhì)相當(dāng)，就會(huì)在其中 有較大的溶解度，即所謂“相似相溶”的規(guī)律。這是選擇適當(dāng)溶劑自中草藥中提取所需要 成分的依據(jù)之一。 　　2．溶劑的選擇：運(yùn)用溶劑提取法的關(guān)鍵，是選擇適當(dāng)?shù)娜軇?。溶劑選擇適當(dāng)，就可 以比較順利地將需要的成分提取出來。選擇溶劑要注意以下三點(diǎn)：①溶劑對(duì)有效成分溶解 度大，對(duì)雜質(zhì)溶解度小；②溶劑不能與中藥的成分起化學(xué)變化；③溶劑要經(jīng)濟(jì)、易得、使 用安全等。 　　常見的提取溶劑可分為以下三類： 　　1）水：水是一種強(qiáng)的極性溶劑。中草藥中親水性的成分，如無機(jī)鹽、糖類、分子不 太大的多糖類、鞣質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸鹽、生物堿鹽及甙類等都能被水溶出。 為了增加某些成分的溶解度，也常采用酸水及堿水作為提取溶劑。酸水提取，可使生物 堿與酸生成鹽類而溶出，堿水提取可使有機(jī)酸、黃酮、蒽醌、內(nèi)酯、香豆素以及酚類成 分溶出。但用水提取易酶解甙類成分，且易霉壞變質(zhì)。某些含果膠、粘液質(zhì)類成分的中 草藥，其水提取液常常很難過濾。沸水提取時(shí)，中草藥中的淀粉可被糊化，而增加過濾 的困難。故含淀粉量多的中草藥，不宜磨成細(xì)粉后加水煎煮。中藥傳統(tǒng)用的湯劑，多用 中藥飲片直火煎煮，加溫可以增大中藥成分的溶解度外，還可能有與其他成分產(chǎn)生“助溶 ”現(xiàn)象，增加了一些水中溶解度小的、親脂性強(qiáng)的成分的溶解度。但多數(shù)親脂性成分在沸 水中的溶解度是不大的，既使有助溶現(xiàn)象存在，也不容易提取完全。如果應(yīng)用大量水煎 煮，就會(huì)增加蒸發(fā)濃縮時(shí)的困難，且會(huì)溶出大量雜質(zhì)，給進(jìn)一步分離提純帶來麻煩。中 草藥水提取液中含有皂甙及粘液質(zhì)類成分，在減壓濃縮時(shí)，還會(huì)產(chǎn)生大量泡沫，造成濃 縮的困難。通常可在蒸餾器上裝置一個(gè)汽一液分離防濺球加以克服，工業(yè)上則常用薄膜 濃縮裝置。 　　2）親水性的有機(jī)溶劑：也就是一般所說的與水能混溶的有機(jī)溶劑，如乙醇（酒精） 、甲醇（木精）、丙酮等，以乙醇最常用。乙醇的溶解性能比較好，對(duì)中草藥細(xì)胞的穿 透能力較強(qiáng)。親水性的成分除蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、果膠、淀粉和部分多糖等外，大多能在 乙醇中溶解。難溶于水的親脂性成分，在乙醇中的溶解度也較大。還可以根據(jù)被提取物 質(zhì)的性質(zhì)，采用不同濃度的乙醇進(jìn)行提取。用乙醇提取比用水量較少，提取時(shí)間短，溶 解出的水溶性雜質(zhì)也少。乙醇為有機(jī)溶劑，雖易燃，但毒性小，價(jià)格便宜，來源方便， 有一定設(shè)備即可回收反復(fù)使用，而且乙醇的提取液不易發(fā)霉變質(zhì)。由于這些原因，用乙 醇提取的方法是歷來最常用的方法之一。甲醇的性質(zhì)和乙醇相似，沸點(diǎn)較低（64℃），但 有毒性，使用時(shí)應(yīng)注意。 　　3）親脂性的有機(jī)溶劑：也就是一般所說的與水不能混溶的有機(jī)溶劑，如石油醚、苯 、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷等。這些溶劑的選擇性能強(qiáng)，不能或不容易提出親 水性雜質(zhì)。但這類溶劑揮發(fā)性大，多易燃（氯仿除外），一般有毒，價(jià)格較貴，設(shè)備要 求較高，且它們透入植物組織的能力較弱，往往需要長時(shí)間反復(fù)提取才能提取完全。如 果藥材中含有較多的水分，用這類溶劑就很難浸出其有效成分，因此，大量提取中草藥 原料時(shí)，直接應(yīng)用這類溶劑有一定的局限性。 　　3．提取方法：用溶劑提取中草藥成分，、常用浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取 法及連續(xù)回流提取法等。同時(shí)，原料的粉碎度、提取時(shí)間、提取溫度、設(shè)備條件等因素 也都能影響提取效率，必須加以考慮。 　　1）浸漬法：浸漬法系將中草藥粉末或碎塊裝人適當(dāng)?shù)娜萜髦?，加入適宜的溶劑（如 乙醇、稀醇或水），浸漬藥材以溶出其中成分的方法。本法比較簡單易行，但浸出率較 差，且如用水為溶劑，其提取液易于發(fā)霉變質(zhì)）須注意加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎?　　2）滲漉法：滲漉法是將中草藥粉末裝在滲漉器中，不斷添加新溶劑，使其滲透過藥 材，自上而下從滲漉器下部流出浸出液的一種浸出方法小當(dāng)溶劑滲進(jìn)藥粉溶出成分比重 加大而向下移動(dòng)時(shí)，上層的溶液或稀浸液便置換其位置，造成良好的濃度差，使擴(kuò)散能 較好地進(jìn)行，故浸出效果優(yōu)于浸漬法。但應(yīng)控制流速，在滲渡過程中隨時(shí)自藥面上補(bǔ)充 新溶劑，使藥材中有效成分充分浸出為止?；虍?dāng)滲滴液顏色極淺或滲涌液的體積相當(dāng)于 ：原藥材重的10倍時(shí)，便可認(rèn)為基本上已提取完全。在大量生產(chǎn)中常將收集的稀滲淮液 作為另一批新原料的溶劑之用。 　　3）煎煮法：煎煮法是我國最早使用的傳統(tǒng)的浸出方法。所用容器一般為陶器、砂罐 或銅制、搪瓷器皿，不宜用鐵鍋，以免藥液變色。直火加熱時(shí)最好時(shí)常攪拌，以免局部 藥材受熱太高，容易焦糊。有蒸汽加熱設(shè)備的藥廠，多采用大反應(yīng)鍋、大銅鍋、大木桶 ，或水泥砌的池子中通入蒸汽加熱。還可將數(shù)個(gè)煎煮器通過管道互相連接，進(jìn)行連續(xù)煎 浸。 　　4）回流提取法：應(yīng)用有機(jī)溶劑加熱提取，需采用回流加熱裝置，以免溶劑揮發(fā)損失 。小量操作時(shí)，可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器。瓶內(nèi)裝藥材約為容量的％～％，溶劑 浸過藥材表面約1～2cm。在水浴中加熱回流，一般保持沸騰約：小時(shí)小放冷過濾，再在 藥渣中加溶劑，作第二、三次加熱回流分別約半小時(shí)，或至基本提盡有效成分為止。此 法提取效率較冷浸法高，大量生產(chǎn)中多采用連續(xù)提取法。 　　5）動(dòng)連續(xù)提取法：應(yīng)用揮發(fā)性有機(jī)溶劑提取中草藥有效成分，不論小型實(shí)驗(yàn)或大型 生產(chǎn)，均以連續(xù)提取法為好，而且需用溶劑量較少，提取成分也較完全。實(shí)驗(yàn)室常用脂 肪提取器或稱索氏提取器。連續(xù)提取法，一般需數(shù)小時(shí)才能提取完全。提取成分受熱時(shí) 間較長，遇熱不穩(wěn)定易變化的成分不宜采用此法。 　?。ǘ┧魵庹麴s法：。水蒸氣蒸餾法，適用于能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞的中草 藥成分的提取。此類成分的沸點(diǎn)多在100℃以上，與水不相混溶或僅微溶，且在約100℃時(shí) 存一定的蒸氣壓。當(dāng)與水在一起加熱時(shí)，其蒸氣壓和水的蒸氣壓總和為一個(gè)大氣壓時(shí)， 液體就開始沸騰，水蒸氣將揮發(fā)性物質(zhì)一并帶出。例如中草藥中的揮發(fā)油，某些小分子 生物堿一麻黃堿、蕭堿、檳榔堿，以及某些小分子的酚性物質(zhì)。牡丹酚（paeonol）等， 都可應(yīng)用本法提取。有些揮發(fā)性成分在水中的溶解度稍大些，常將蒸餾液重新蒸餾，在 最先蒸餾出的部分，分出揮發(fā)油層，或在蒸餾液水層經(jīng)鹽析法并用低沸點(diǎn)溶劑將成分提 取出來。例如玫瑰油、原白頭翁素（protoanemonin）等的制備多采用此法。 　?。ㄈ┥A法：固體物質(zhì)受熱直接氣化，遇冷后又凝固為固體化合物，稱為升華。 中草藥中有一些成分具有升華的性質(zhì)，故可利用升華法直接自中草藥中提取出來。例如 樟木中升華的樟腦（camphor），在《本草綱目》中已有詳細(xì)的記載，為世界上最早應(yīng)用升 華法制取藥材有效成分的記述。茶葉中的咖啡堿在178℃以上就能升華而不被分解。游離 羥基蒽醌類成分，一些香豆素類，有機(jī)酸類成分，有些也具有升華的性質(zhì)。例如七葉內(nèi) 酯及苯甲酸等。 　　升華法雖然簡單易行，但中草藥炭化后，往往產(chǎn)生揮發(fā)性的焦油狀物，粘附在升華 物上，不易精制除去，其次，升華不完全，產(chǎn)率低，有時(shí)還伴隨有分解現(xiàn)象。 分離和純化： 　　上述提取法所得到的中草藥提取液或提取物仍然是混合物，需進(jìn)一步除去雜質(zhì)，分 離并進(jìn)行精制。具體的方法隨各中草藥的性質(zhì)不同而異，以后將通過實(shí)例加以敘述，此 處只作一般原則性的討論。 　?。ㄒ唬┤軇┓蛛x法：一般是將上述總提取物，選用三、四種不同極性的溶劑，由低 極性到高極性分步進(jìn)行提取分離。水浸膏或乙醇浸膏常常為膠伏物，難以均勻分散在低 極性溶劑中，故不能提取完全，可拌人適量惰性填充劑，如硅藻土或纖維粉等，然后低 溫或自然干燥，粉碎后，再以選用溶劑依次提取，使總提取物中各組成成分，依其在不 同極性溶劑中溶解度的差異而得到分離。例如粉防己乙醇浸膏，堿化后可利用乙醚溶出 脂溶性生物堿，再以冷苯處理溶出粉防己堿，與其結(jié)構(gòu)類似的防己諾林堿比前者少一甲 基而有一酚羥基，不溶于冷苯而得以分離。利用中草藥化學(xué)成分，在不同極性溶劑中的 溶解度進(jìn)行分離純化，是最常用的方法。 　　廣而言之，自中草藥提取溶液中加入另一種溶劑，析出其中某種或某些成分，或析 出其雜質(zhì)，也是一種溶劑分離的方法。中草藥的水提液中常含有樹膠、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì) 、糊化淀粉等，可以加入一定量的乙醇，使這些不溶于乙醇的成分自溶液中沉淀析出， 而達(dá)到與其它成分分離的目的。例如自中草藥提取液中除去這些雜質(zhì)，或自白及水提取 液中獲得白及膠，可采用加乙醇沉淀法；自新鮮括樓根汁中制取天花粉素，可滴人丙酮 使分次沉淀析出。目前，提取多糖及多肽類化合物，多采用水溶解、濃縮、加乙醇或丙 酮析出的辦法。 　　此外，也可利用其某些成分能在酸或堿中溶解，又在加堿或加酸變更溶液的pH后， 成不溶物而析出以達(dá)到分離。例如內(nèi)酯類化合物不溶于水，但遇堿開環(huán)生成羧酸鹽溶于 水，再加酸酸化，又重新形成內(nèi)酯環(huán)從溶液中析出，從而與其它雜質(zhì)分離；生物堿一般 不溶于水，遇酸生成生物堿鹽而溶于水，再加堿堿化，又重新生成游離生物堿。這些化 合物可以利用與水不相混溶的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取分離。一般中草藥總提取物用酸水、堿 水先后處理，可以分為三部分：溶于酸水的為堿性成分（如生物堿），溶于堿水的為酸 性成分（如有機(jī)酸），酸、堿均不溶的為中性成分（如甾醇）。還可利用不同酸、堿度 進(jìn)一步分離，如酸性化臺(tái)物可以分為強(qiáng)酸性、弱酸性和酷熱酚性三種，它們分別溶于碳 酸氫鈉、碳酸鈉和氫氧化鈉，借此可進(jìn)行分離。有些總生物堿，如長春花生物堿、石蒜 生物堿，可利用不同rH值進(jìn)行分離。但有些特殊情況，如酚性生物堿紫董定堿（corydi ne）在氫氧化鈉溶液中仍能為乙醚抽出，蝙蝠葛堿（dauricins）在乙醚溶液中能為氫氧 化鈉溶液抽出，而溶于氯仿溶液中則不能被氫氧化鈉溶液抽出；有些生物堿的鹽類，如 四氫掌葉防己堿鹽酸鹽在水溶液...
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